Separarea electroforetica a proteinelor

Separarea electroforetica a proteinelor

Termenul de electroforeza descrie migrarea unei particule incarcate electric sub influenta unui camp electric.

Constituientii elementari proteici, aminoacizii, sunt substante amfotere, functionand in mediu bazic ca acizi si in mediu acid ca baze.

pH-ul izoelectric (pHi) este pH-ul la care disociatia acida o egaleaza pe cea bazica, incarcatura electrica este nula si migrarea nu are loc.

Valorile sale mai mari sau mai mici determina incarcarea electrica si sensul de migrare astfel incat, un pH bazic va imprima sarcina electrica negativa tuturor proteinelor, iar acestea vor migra spre anod (+).

Din cele expuse mai sus reiese ca pentru realizarea unei fractionari electroforetice sunt necesare doua conditii:

aplicarea unui potential electric uniform si constant;

mentinerea unui pH constant.

In functie de natura suportului (mediului) de migrare utilizat pentru fractionare electroforeza se clasifica in:

electroforeza libera in coloana de lichid (mediu omogen in care migrarea se desfasoara in interiorul unei faze lichide;

electroforeza de zona (mediu eterogen) in care migrarea se desfasoara pe suporturi solide de migrare:

electroforeza pe hartie de filtru

electroforeza in geluri (agar, agaroza, amidon, folii de acetat de celuloza, poliacrilamida sau mixte)

Electroforeza proteinelor pe gel de amidon sau poliacrilamida este tehnica cea mai usoara si mai putin costisitoare, care implica o cantitate limitata de materiale, un timp de lucru scurt si o reproductibilitate foarte buna, motiv pentru care in laboratorul clinic tinde sa inlocuiasca separarea electroforetica pe hartie de filtru.

Electroforeza este utilizata pentru analiza si purificarea moleculelor foarte mari cum sunt proteinele si acizii nucleici, dar se aplica si altor molecule ca glucide, aminoacizi, peptide.

In prezent, se poate efectua electroforeza pentru sange, urina, sucuri digestive (saliva si suc gastric), lichid cefalorahidian, lichide patologice de punctie.

Pentru sange, electroforeza studiaza proteinele serice si nu pe cele plasmatice, deoarece fibrinogenul impiedica separarea neta a fractiilor. Pentru efectuarea electroforezei, se recolteaza sange venos in vacutainere fara anticoagulant.

Efectuarea electroforezei se face in paralel cu dozarea proteinelor totale serice.